牙髓干細胞在周圍神經(jīng)損傷修復中的研究進展

創(chuàng)傷引起的口腔頜面部周圍神經(jīng)損傷（peripheral nerves injury，PNI）是口腔醫(yī)學臨床常見病，這種傷害常來源于外傷或手術(shù)失誤，表現(xiàn)為手術(shù)部位周圍疼痛、功能喪失、美觀異常中華人民共和國執(zhí)業(yè)醫(yī)師法。與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相比，外周神經(jīng)系統(tǒng)在損傷后具有自行再生的潛力，但是結(jié)果并不理想，約有三分之一的PNI患者日常生活仍存在極大困擾口腔臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師。

目前，牙髓干細胞（dental pulp stem cells，DPSCs）治療是一種極具潛力的PNI修復方法，它不僅具有間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的特性，還具有分化為中胚層細胞的能力及沿著神經(jīng)譜系分化的潛力口腔醫(yī)學技術(shù)。DPSCs在組織工程學修復、周圍神經(jīng)再生、疾病重塑和治療中已經(jīng)取得了一定的進展，本文就DPSCs同雪旺細胞（Schwanncs，SCs）的關(guān)系、分類及其在組織工程學方向的研究進展作一綜述口腔修復工藝。

1.DPSCs可分化為SCs

MSCs可以從多種組織中分離出來，它們最常從骨髓或脂肪組織中獲得，也可來源于牙髓組織綜合治療椅，牙片機，潔牙機?？蓮拿撀涞娜檠乐蝎@取人脫落的乳牙牙髓干細胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth，SHED），從第三恒磨牙或正畸拔除的恒牙中獲得人恒牙牙髓干細胞（human dental pulp stem cells，hDPSCs），臨床應(yīng)用時不會對患者造成額外的損傷因而更容易被患者接受執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師，待遇優(yōu)厚，底薪加提成。

研究顯示DPSCs同其他類型間充質(zhì)干細胞相比具有來源豐富、提取簡單、免疫原性低以及體外增殖率高等優(yōu)點，即使經(jīng)過傳代培養(yǎng)或長期冷凍保存，仍具有牙源性、骨源性、軟骨源性、神經(jīng)源性、脂肪源性和肌源性等多向分化能力按照科學發(fā)展理念與時俱進，適應(yīng)時代需要，。

1.1SCs在PNI中的作用

當頜面部周圍神經(jīng)截斷性損傷后，軸突近端通?？梢源婊睿h端受損則會迅速閉合并在損傷后3天內(nèi)發(fā)生強制性瓦勒變性建立信用評價和服務(wù)能力評審制度，有 利于加強對社會辦醫(yī)的管理，引導規(guī)范行醫(yī)，提高管理水平。在瓦勒變性的過程中SCs不但具有誘導細胞自噬的能力，它還能分泌在受損神經(jīng)的恢復中起關(guān)鍵作用的神經(jīng)營養(yǎng)因子，如神經(jīng)生長因子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子等價格的制定首先要符合門診的定位和定位群體的口腔健康消費心理。幸存的SCs和髓鞘能夠幫助引導新長出的神經(jīng)支配目標組織先進的消毒設(shè)施和嚴格的無菌操作，提供了優(yōu)質(zhì)醫(yī)療、優(yōu)質(zhì)服務(wù)的保證。

Isaacman-Beck等通過在斑馬魚中使用活細胞成像技術(shù)，發(fā)現(xiàn)再生的運動軸突對原來的肌肉區(qū)域表現(xiàn)出強烈的偏好，并且軸突在選擇原路徑之前會廣泛地向各個方向探測正確的生長軌跡七一：一醫(yī)、一助、一機、一針、一管、一消毒、一無菌包.。這一過程中SCs受損后賴氨酸羥化酶3（lysylhydroxylase3，LH3）的表達量增加可以恢復軸突靶向再生的能力秉承“多聽患者講一點，多為患者想一點”的服務(wù)理念。此外，在斷面附近的SCs能夠表達LH3底物膠原蛋白4a5（collagen4a5，col4a5），在再生過程中col4a5可能通過軸突導向抑制因子Slit1a進行方向探測，使不適當?shù)纳L軌跡上的軸突退化，以達到選擇性再生的目的執(zhí)行力是口腔診所核心競爭力形成的關(guān)鍵。

1.2DPSCs可向SCs樣細胞誘導分化

DPSCs是牙髓中的多能干細胞，可以通過分泌外泌體將信號分子傳遞給SCs介導細胞間通訊，且在特定神經(jīng)誘導培養(yǎng)基上擴增良好，其具有神經(jīng)分化能力可分化為SCs樣細胞管理是就要淘汰人渣、激活人員、培養(yǎng)人手、重用人才、與人物綁定。在神經(jīng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入堿性成纖維細胞生長因子和表皮生長因子可誘導DPSCs神經(jīng)向分化口腔招聘網(wǎng)免費發(fā)布口腔招聘信息，。

Hei等采用整合素β4（CD104）、S-100蛋白、層粘連蛋白（Laminin）、神經(jīng)營養(yǎng)因子低親和力受體（low affinity neurotrophin receptor，p75NTR）免疫細胞化學方法對分化后的DPSCs成功地進行了SCs樣細胞的鑒定，且脈沖電磁場的應(yīng)用更加促進了DPSCs向SCs樣細胞的分化牙科醫(yī)生免費找工作，。

有研究顯示，磁性細胞分選方法分選出表達p75NTR、巢蛋白（Nestin）和SOX-10（SRY-related high-mobility-group（HMG）-box protein-10，SOX-10）的Stro-1+/cKit+/CD34+DPSCs，在體外具有分化為SCs樣細胞的能力，與髓鞘分化相關(guān)并可在體內(nèi)促進軸突再生口腔修復醫(yī)生，口腔種植醫(yī)生，。這一DPSCs亞群容易獲得、體外增殖迅速、可成功地整合到宿主組織中，因此可能成為再生醫(yī)學的優(yōu)秀候選者，特別是在神經(jīng)組織工程領(lǐng)域口腔種植，口腔正畸醫(yī)生。

2.DPSCs與SHED在PNI中的作用差異

DPSCs缺乏主要組織相容性復合體Ⅱ類抗原的表達，免疫原性較低，能夠抑制同種異體反應(yīng)的T細胞增殖，不刺激免疫應(yīng)答；也可以通過抑制促炎細胞因子的產(chǎn)生和刺激抗炎細胞因子、抗原特異性T細胞的產(chǎn)生來減少體內(nèi)的炎癥反應(yīng)熟悉掌握方絲工矯正技術(shù)，。乳牙和恒牙的牙髓干細胞在周圍神經(jīng)中的作用存在相似性，也存在一定的差異熟練掌握口腔內(nèi)科治療，。

2.1免疫調(diào)節(jié)

SHED可通過分泌單核細胞趨化因子-1調(diào)節(jié)巨噬細胞遷移和浸潤，表現(xiàn)出獨特的免疫調(diào)節(jié)特性，有助于組織修復中華人民共和國執(zhí)業(yè)醫(yī)師法。DPSCs通過減少小膠質(zhì)細胞激活、下調(diào)炎性標志物離子鈣接頭蛋白分子1和活性氧的積累、降低炎癥細胞因子的分泌，表現(xiàn)出較強的免疫調(diào)節(jié)和抗炎能力口腔臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師。

2.2抗炎作用

SHED作用于巨噬細胞，上調(diào)CC類趨化因子2和白血病抑制因子的表達，使巨噬細胞大量浸潤于損傷部位，將巨噬細胞表型從加速組織破壞的促炎M1巨噬細胞轉(zhuǎn)化為促進組織修復的抗炎M2巨噬細胞口腔醫(yī)學技術(shù)。DPSCs表達的白細胞介素-10具有抗炎活性，而且DPSCs表達的巨噬細胞集落刺激因子高于粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，可誘導巨噬細胞M2極化，在一定程度上可緩解神經(jīng)性疼痛和平衡神經(jīng)損害，最終減少了周圍神經(jīng)損傷后氧化應(yīng)激和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)異常所致的神經(jīng)炎癥反應(yīng)口腔修復工藝。

2.3神經(jīng)標志物的表達

DPSC和SHED的神經(jīng)向分化后可表達成熟的神經(jīng)元標記物β-微管蛋白Ⅲ（β-Ⅲ-Tubulin）、GA-TA結(jié)合蛋白3等，在幼稚狀態(tài)下也可自發(fā)表達早期神經(jīng)元和神經(jīng)嵴標記物Nestin等綜合治療椅，牙片機，潔牙機?；蛐酒治鲲@示，SHED攜帶較高的八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-4（octamer-binding transc ription factor-4，OCT4）、SOX2、Nanog等胚胎標志基因，促進成脂、成骨；而DPSCs攜帶較高的人類配對盒基因（paired-boxgene 6，PAX6）、Nestin、β-Ⅲ-Tubulin等神經(jīng)源性基因，有利于神經(jīng)發(fā)生執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師，待遇優(yōu)厚，底薪加提成。

2.4血管生成

在神經(jīng)損傷部位缺氧條件下SHED可誘導巨噬細胞產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長因子-A（vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）增強了損傷部位新血管的形成，并使SCs遷移促成Büngner帶的形成按照科學發(fā)展理念與時俱進，適應(yīng)時代需要，。DPSCs本身具有較高的血管生成特性，也可分泌VEGF-A刺激血管形成，分化為SCs后仍保留其在內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和血管形成的能力建立信用評價和服務(wù)能力評審制度，有 利于加強對社會辦醫(yī)的管理，引導規(guī)范行醫(yī)，提高管理水平。

2.5其他作用

SHED在細胞生長動力學方面具有較高的增殖率，增長速度約為DPSCs的兩倍，細胞集落形成特性、集落數(shù)量和大小均高于DPSCs；而DPSCs比SHED更好的聚集成神經(jīng)球，顯示出更多地致力于神經(jīng)元譜系的表達價格的制定首先要符合門診的定位和定位群體的口腔健康消費心理。hDPSCs具有肌生成潛力，可使營養(yǎng)不良骨骼肌的組織病理得到改善，可用于促進橫紋肌萎縮的再生，也可提高糖尿病大鼠的坐骨神經(jīng)傳導速度，使骨骼肌血管密度和神經(jīng)纖維密度增加先進的消毒設(shè)施和嚴格的無菌操作，提供了優(yōu)質(zhì)醫(yī)療、優(yōu)質(zhì)服務(wù)的保證。

DPSCs和SHED在PNI修復過程有兩個潛在機制，即直接分化或融合后替換丟失的內(nèi)源性細胞，以及間接分泌可溶性因子或外泌體介導對存活內(nèi)源性細胞的支持，這兩種機制可能是單獨作用或協(xié)同作用七一：一醫(yī)、一助、一機、一針、一管、一消毒、一無菌包.。

3.DPSCs組織工程學修復PNI

自體神經(jīng)移植是PNI修復金標準，它提供了富含SCs的結(jié)構(gòu)來引導軸突再生，雖然免疫排斥反應(yīng)會極低，但是會造成供體區(qū)域神經(jīng)損傷，導致供區(qū)神經(jīng)功能喪失秉承“多聽患者講一點，多為患者想一點”的服務(wù)理念。研究者將DPSCs與組織工程神經(jīng)導管支架相結(jié)合，用于傳遞信號分子、生長因子、藥物等執(zhí)行力是口腔診所核心競爭力形成的關(guān)鍵。組織工程近年來逐漸成為研究的熱點內(nèi)容之一，其主要目標是開發(fā)能夠治愈、修復或再生受傷病變組織和器官的生物材料替代品管理是就要淘汰人渣、激活人員、培養(yǎng)人手、重用人才、與人物綁定。

組織工程學將生物相容性材料（如聚四氟乙烯、硅樹脂、聚乙烯、膠原、生物聚合物等）與DPSCs、神經(jīng)生長相關(guān)因子、血管生成相關(guān)因子等相結(jié)合為神經(jīng)再生提供一個可控的、可選擇的、可改良的微環(huán)境口腔招聘網(wǎng)免費發(fā)布口腔招聘信息，。有研究表明，SHED同聚乙醇酸神經(jīng)導管（polygly-colic acid tube，PGA）聯(lián)合應(yīng)用不僅可促進面神經(jīng)下頜支的再生，由于導管的存在還減少了受損組織之間的粘連；多種材料的聯(lián)合應(yīng)用比單一材料的使用存在更多的優(yōu)勢，通過物理性吸附、共價鍵結(jié)合、混紡、同軸電紡等方式對支架進行加工修飾，可改善材料性能，使其更有利于神經(jīng)修復牙科醫(yī)生免費找工作，。

Lackington等用膠原涂層PGA神經(jīng)導管修復大鼠面神經(jīng)缺損，結(jié)果表明帶涂層修飾比不帶修飾的導管修復效果好；Hu等將聚羥基丁酸戊酯和聚環(huán)氧乙烷按照9∶1的質(zhì)量比進行混合靜電紡得到三維的神經(jīng)支架，用于神經(jīng)再生實驗，證明后者的加入提高了干細胞與聚羥基丁酸戊酯的生物相容性口腔修復醫(yī)生，口腔種植醫(yī)生，。大量研究結(jié)果顯示聚合物的組合改變了導管的物理性質(zhì)，也改變了它們的神經(jīng)引導特性口腔種植，口腔正畸醫(yī)生。

DPSCs同組織工程支架的聯(lián)合應(yīng)用維持了受損神經(jīng)解剖結(jié)構(gòu)的完整，并提供了方向引導和空間支撐，但在神經(jīng)導管提供的微環(huán)境中軸突再生的分子機制尚不清楚，DPSCs在再生醫(yī)學和組織工程中的應(yīng)用仍需要不斷的探索熟悉掌握方絲工矯正技術(shù)，。

4.DPSCs應(yīng)用于PNI修復過程中面臨的問題

近年來，研究者開始重視發(fā)展DPSCs對PNI的治療策略，以增強軸突再生、促進靶組織選擇性再生并調(diào)節(jié)周圍神經(jīng)系統(tǒng)的重組，但高質(zhì)量的功能性恢復面臨的問題仍然很多，包括：

①干細胞的選擇，在有良好適應(yīng)證的年輕患者中選擇合適的健康牙齒，采用改進的干細胞分離、培養(yǎng)技術(shù)和神經(jīng)誘導方案，使DPSCs向著有利于神經(jīng)分化的方向發(fā)展，這一過程需要考慮干細胞的來源、采集方式、免疫原性、增殖效率等因素；

②功能性鏈接的恢復，由于神經(jīng)纖維化導致神經(jīng)瘤的形成、遠端軸突瓦勒變性的發(fā)生及目標組織的不可逆性萎縮等問題的存在，使恢復神經(jīng)的功能性鏈接成為一項難題；

③軸突再生方向的不可控，神經(jīng)橫斷傷破壞了神經(jīng)和神經(jīng)基底層的連續(xù)性，迫使再生軸突穿過無細胞環(huán)境、穿越損傷間隙，這一過程中再生的軸突向各個方向不斷發(fā)展，其方向具有不可控性；

④組織工程材料的選擇與應(yīng)用，神經(jīng)損傷后結(jié)締組織向缺損部位延伸、粘連影響神經(jīng)愈合，而組織工程學修復可以將周圍結(jié)締組織分離，保證神經(jīng)修復空間，但其尚在發(fā)展的初期，材料的選擇、技術(shù)的應(yīng)用正在研究階段；

⑤動物模型的局限，國內(nèi)外實驗大部分都是建立在動物模型之上，其神經(jīng)損傷模型表現(xiàn)出的再生潛力與人體不同，將其轉(zhuǎn)化到臨床應(yīng)用于人體修復仍是一項嚴峻的挑戰(zhàn)；⑥修復機制仍不明確熟練掌握口腔內(nèi)科治療，。

5.總結(jié)與展望

DPSCs不但可以分泌細胞因子作用于損傷后殘存的SCs，還具有誘導向SCs樣細胞分化的潛力；DPSCs與組織工程學聯(lián)合應(yīng)用成為PNI修復的新趨勢；然而其受患者的年齡、病變部位和類型、手術(shù)修復的時機和方式以及軸突再生跨越損傷的距離等多種因素影響中華人民共和國執(zhí)業(yè)醫(yī)師法。乳牙和恒牙的牙髓干細胞是存在于同一生物體不同時期的兩種DPSCs細胞狀態(tài)，二者除了具有MSC的基本特征外，還具有不同的生物學特性，它們的區(qū)別應(yīng)用為神經(jīng)修復提供了一個新的選擇口腔臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師。